分子克隆

分子克隆技术是为现代生物技术奠定基础的技术之一。该技术在20世纪80年代首次使用，并允许将来自人类的胰岛素基因插入酵母和大肠杆菌中。这使得这些微生物能够产生胰岛素，而胰岛素是治疗糖尿病的主要药物。从那时起，分子克隆和基因工程已成为最基本的技术之一，从制药生产，生物乙醇生产，连同医疗和基础研究。在分子克隆实验室，您将学习如何组装一个包含RAD52和GFP的表达载体。目的是利用多西环素控制RAD52的表达水平，通过观察GFP信号监测RAD52的表达水平。

向量组装

在分子克隆实验室的第一部分，你将学习如何从酵母细胞提取DNA和限制酶分离的DNA从另一个载体。首先，准备提取的DNA并测量浓度，然后，使用正确的连接酶、缓冲液和培养温度组装一个包含感兴趣基因(RAD52)和GFP的载体。

转换

组装好的载体将通过电穿孔转化为酵母细胞。RAD52基因的表达由基因调节器调控。培养基中加入强力霉素后，RAD52基因会被沉默。GFP作为RAD52的报告基因，RAD52活性的细胞也表达GFP, RAD52沉默的细胞不表达GFP。GFP信号通过将细胞暴露在蓝光下进行监测。

DNA损伤修复系统

RAD52被认为是DNA修复的重要参与者。你们将进行一项实验，比较在表达RAD52的细胞和沉默RAD52的细胞中，紫外线辐射诱导DNA损伤的结果。如果RAD52在DNA修复中很重要，那么RAD52沉默的细胞将无法在紫外线照射治疗中存活。总之，分子克隆实验室将给你一个分子克隆技术和报告基因的概述，你将学习所有关于DNA损伤和DNA修复系统。